樺褐孔菌(Phaeoporus obliquus J. Schroet),是一 種生長在寒帶的木腐菌,主要分布于北緯 45°~50° 地區(qū),包括北歐、俄羅斯、日本及中國黑龍江和吉林等地區(qū)。 其化學(xué)成分包括多糖類化合物、芳香物質(zhì)、 多酚類化合物、三萜類化合物等 。 從 16 世紀(jì)以 來,樺褐孔菌作為民間藥物,在預(yù)防和治療癌癥、心臟病、肝病、降血糖、胃病等疾病方面功效獨(dú)特且無 明顯的毒副作用 ,但尚未見樺褐孔菌皂苷對(duì)非酒 精性脂肪肝病的研究報(bào)道。
樺褐孔菌購于黑龍江省綏芬河市;TG、TC、 LDL、HDL、ALT 試劑盒購于上海源葉生物科有限公司;石蠟、乙醇購于北京化工廠;中性樹膠購 自上海凱博生物有限公司;HE 染色液購自Solarbio 公司。 CX31 型電子顯微成像系統(tǒng) (Olympus 公司); MT-360 型靜音混合器 (江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司);BT25S 型電子天平 (德國賽多利斯集團(tuán));R20 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(BUCHI Switzerland 公司)。
將樺褐孔菌粉末過篩, 準(zhǔn)確稱取 5 g 粉末溶于 30%的乙醇溶液中,分別改變提取條件為提取溫度、 提取時(shí)間、料液比以及超聲功率,用 80%的乙醇溶 液沉淀多糖后,4 000 r / min 離心 7 min 后取上清液, 減壓濃縮至浸膏后水浴至干,得粗制多糖,通過標(biāo)準(zhǔn) 曲線的方法測(cè)定含量。
在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上, 以樺褐孔菌多糖提取率 為考察指標(biāo),進(jìn)行 L9(34 )正交試驗(yàn),各因素與水平見表 1。
將 40 只雄性昆明小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng) 7 d 后隨機(jī) 分為正常組、模型組和藥物低、高劑量組,每組 10 只,除正常組給予普通飼料外,其余各組均給予高糖 高脂飼料造模,每天定點(diǎn)對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃,正常組和 模型組小鼠灌胃等量的生理鹽水, 低劑量給藥組給 予 60 mg / kg 樺褐孔菌多糖進(jìn)行灌胃,高劑量給藥組給予 120 mg / kg 樺褐孔菌多糖進(jìn)行灌胃, 連續(xù)灌胃 給藥處理 8 周。
通過對(duì)比分析分別改變提取時(shí)間、超聲功率、提 取溫度、 料液比條件下樺褐孔菌多糖類物質(zhì)的提取 率。 結(jié)果表明,提取時(shí)間 30 min、超聲功率 40%,提 取溫度 40 ℃、 料液比 1∶15 時(shí)樺褐孔菌中的多糖提 取量最大。 通過正交試驗(yàn)確定樺褐孔菌多糖的最佳 提取工藝。正交試驗(yàn)結(jié)果表明,影響樺褐孔菌多糖類 物質(zhì)提取量的因素主次順序?yàn)?B>A>D>C,超聲功率 和超聲時(shí)間對(duì)樺褐孔菌多糖提取效果影響相對(duì)較 大, 即最佳的超聲功率和超聲溫度時(shí)樺褐孔菌的多 糖提取量最大,達(dá)到顯著水平(P<0.05),其次為提取 溫度、料液比。小鼠灌胃給藥 8 周后,與模型組比較,不同濃度 的樺褐孔菌多糖提取物對(duì)小鼠肝臟有不同程度的改 善, 其中高劑量給藥組肝臟指數(shù)明顯降低, 達(dá)到 60.31 mg / g,低劑量給藥組的肝臟指數(shù)為 69.72 mg / g。灌胃給藥 8 周 后, 小鼠血清中 TC、TG、LDL、 HDL 及 ALT 均有不同程度的改善。 結(jié)果表明,與模 型組相比,小鼠血清中的 TG 水平比正常組高,給藥 組小鼠血清中 TG 含量稍有降低,但并不顯著;模型 組小鼠血清中膽固醇水平為 4.58 mmol / L,給藥組小 鼠血清中膽固醇水平明顯下降(P<0.01),分別為 2.16 mmol / L 和 3.32 mmol / L;與模型組相比,樺褐孔菌 高濃度給藥組小鼠血清中的 LDL、HDL 水平顯著降 低(P<0.01),分別下降到 0.36 mmol / L 和 1.97 mmol / L, 低劑量給藥組下降到 0.75 mmol / L 和 2.52 mmol / L; 與模型組相比,樺褐孔菌不同濃度給藥組小鼠血清 中 ALT 水平下降明顯(P<0.01)。
非酒精性脂肪肝(NAFLD)是指雖無過量飲酒史但類似于酒精性脂肪肝的肝臟組織學(xué)病變的一種 嚴(yán)重危害人類健康的慢性疾病。 目前,中國 NAFLD 的發(fā)病率為 15%左右, 并呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì),已 經(jīng)成為一種嚴(yán)重危害人類健康的世界性疾病, 但其 發(fā)病機(jī)制尚不清楚 。
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