中藥口服液體制劑( 如合劑、糖漿劑、酒劑等) 多含 動(dòng)植物成分，蛋白質(zhì)和糖分含量高，且原材料中攜帶大 量微生物，產(chǎn)品在生產(chǎn)、貯藏和使用過程中易受微生物 污染，甚至發(fā)生霉變，故應(yīng)確認(rèn)藥物的抗菌活性。如藥品 本身抑菌效力不足，應(yīng)根據(jù)制劑特性添加適宜的抑菌 劑，以防止?jié)撛诘奈⑸镂廴?。抑菌? 也稱防腐 劑) 是一類防止或限制微生物生長(zhǎng)與繁殖的化學(xué)藥品， 其主要作用是保證藥劑質(zhì)量，防止藥劑尤其是多劑量包 裝制劑的微生物污染 。

儀器: LDZX － 80KCS 型壓力蒸汽滅菌器( 上海申安 醫(yī)療器 械 廠) ; HFsafe － 1800TE Ⅱ，B2 型 生 物 安 全 柜 ( 上海力申科學(xué)儀器有限公司) ; LＲH － 250F 型生化培 養(yǎng)箱; MJ 250FI 型霉菌培養(yǎng)箱( 上海一恒科學(xué)儀器有限 公司) ; VOＲTEX － 5 型渦旋混合器( 海門市其林貝爾儀器制造有限公司) ; Densi CHEK Plus 比濁儀( 美國生物 梅里埃公司) 。 培養(yǎng)基及稀釋液: 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基( TSA) ， 沙式葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基( SDA) ，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 ( TSB) ，沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基( SDB) ，pH 7． 0 無菌氯 化鈉 － 蛋白胨緩沖液，均由北京三藥科技開發(fā)公司提 供，培養(yǎng)基適用性檢查符合 2015 年版《中國藥典》要求。

菌 種 : 細(xì) 菌 ，包 括 金 黃 色 葡 萄 球 菌〔CMCC( B) 26003〕、銅綠假單胞菌〔CMCC( B) 10104〕和大腸埃希菌 〔CMCC( B) 44102〕; 真 菌 ，包 括 白 色 念 珠 菌〔CMCC( F) 98001〕和黑曲霉〔CMCC( F) 98003〕。上述 5 種標(biāo)準(zhǔn)菌株均 購自中國食品藥品檢定研究院，工作用菌株為第 2 代。 試藥: 銀翹解毒合劑( 樣品 A 為每瓶 100 mL，抑菌 劑為山梨酸，含量為 0． 1% ) ; 止咳枇杷合劑( 樣品 B 為 每瓶 120 mL，抑菌劑為苯甲酸鈉，含量為 0． 26% ) ; 參術(shù) 止帶糖漿( 樣品 C 為每瓶 210 mL，抑菌劑為苯甲酸鈉， 含量為 0． 30% ) 。

接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌及銅綠假單胞菌 的新鮮培養(yǎng)物至 TSB 液體培養(yǎng)基中，35 ℃ 培養(yǎng) 18 h; 接 種白色念珠菌于 SDB 液體培養(yǎng)基，25 ℃ 培養(yǎng) 24 h; 用 0． 9% 無菌氯化鈉溶液稀釋并制成試驗(yàn)所需濃度的菌懸 液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至 SDA 瓊脂培養(yǎng)基中，25 ℃培 養(yǎng) 7 d 或 直 至 獲 得 豐 富 的 孢 子 ，加 入 3 ～ 5 mL 含 0． 05% 聚山梨酯 80 的 0． 9% 無菌氯化鈉溶液，將孢子 洗脫，然后吸出孢子懸液置無菌試管內(nèi); 用含 0． 05% 聚 山梨酯 80 的 0． 9% 無菌氯化鈉溶液稀釋，并制成試驗(yàn) 所需濃度的菌懸液。

供 試 液 制 備 : 取 各 樣 品 10 mL，分 別 加 入 90 mL pH 7． 0 無菌氯化鈉 － 蛋白胨緩沖液，45 ℃ 恒溫振蕩 15 min，制成 1 ∶ 10( V ∶ V) 的供試液。 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn): 取 5 種供試液，分裝于 5 個(gè) 無菌試管中，每管裝量 9． 9 mL，再分別加入含菌量不大于 104 cfu / mL 的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃 希菌、白色念珠菌、黑曲霉試驗(yàn)菌液 0． 1 mL。用 0． 1 mL pH 7． 0 無菌氯化鈉 － 蛋白胨緩沖液代替菌液同法制備 供 試 品 對(duì) 照 組 ，以 及 不 加 樣 品 的 菌 液 對(duì) 照 組。分 別 吸 取試驗(yàn)組、供試品對(duì)照組、菌液對(duì)照組液體各 1 mL， 置直徑90 mm 的無菌平皿中，平行 2 份，細(xì)菌注入約 20 mL 溫度不超過 45 ℃融化的 TSA 培養(yǎng)基，搖勻，凝固 后置 35 ℃ 倒置培養(yǎng) 2 ～ 3 d; 真菌注入約 20 mL 不超過 45 ℃ 融化的 SDA 培養(yǎng)基，搖勻，凝固后置 25 ℃ 倒置 培養(yǎng) 3 ～ 5 d。 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)回收率: 試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供 試品對(duì)照組菌落數(shù)的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值計(jì)算 回收率，結(jié)果見表 1。各試驗(yàn)菌的回收率均在 0． 8 ～ 1． 0 范圍內(nèi)，符合要求，說明抑菌效力試驗(yàn)中的微生物存活 菌落數(shù)的測(cè)試可采用平皿法( 1 ∶ 10，1 mL) 進(jìn)行。

3 討論

藥品在使用和保存過程中有可能被空氣中的微生 物污染，進(jìn)而產(chǎn)生安全隱患。抑菌劑是藥物制劑中常 見的一種附加劑，企業(yè)在開發(fā)階段都必須確認(rèn)藥品中 抑菌劑的抑菌效力。近年來，國產(chǎn)制劑抑菌劑濫用問 題越來越受關(guān)注。2010 年版《中國藥典》首次收載了抑 菌效力檢查法，制定了控制標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法，2015 年 版《中國藥典》對(duì)抑菌效力檢查法做了很大調(diào)整?，F(xiàn)有 文獻(xiàn)主要著眼于眼用制劑抑菌劑抑菌效力的檢查 ， 其他劑型抑菌效力檢測(cè)方法的探討目前較少。本研 究中依據(jù)藥典方法對(duì) 3 種中藥口服液體制劑進(jìn)行了 加菌試驗(yàn)，比較試驗(yàn)菌在樣品中的存活率，以探討樣品的 抑菌效力，對(duì)生產(chǎn)企業(yè)研發(fā)階段抑菌濃度的確定有一定參考價(jià)值。



 

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