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黃原膠基因工程菌發(fā)酵條件優(yōu)化(其林貝爾QL-9

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2020-03-09 08:49【

1 材料與方法 


1. 1 材料 


1. 1. 1 菌株和試劑


黃原膠高產(chǎn)菌株 XccYH1 由本實驗室 通過基因工程方法獲得??股乩F劫徸?Sigma 公司。 


1. 1. 2 儀器


PB - 10 pH 計( SARTORIUS AG) ; MP2002 電 子天平( 上海恒平科學(xué)儀器有限公司) ; DHP - 9052 型電熱恒 溫培養(yǎng)箱( 上海一恒科學(xué)儀器有限公司) ; SW - CJ - 2FD 潔 凈工作臺( 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司) ; ZHWY200B 恒溫培 養(yǎng)振蕩器( 上海智城分析儀器制造有限公司) ; LS - B50L -Ⅱ 立式壓力蒸汽滅菌鍋( 江陰濱江醫(yī)療設(shè)備有限公司) ; QL - 902 漩渦混合儀( 海門市其林貝爾儀器制造有限公司) ; DHG - 9240 鼓風干燥箱( 上海一恒科學(xué)儀器有限公司) 。 


1. 2 方法 


1. 2. 1 野油菜黃單胞菌胞外多糖的檢測


將菌株 XccYH1 接種于 NYG 液體培養(yǎng)基( 5 g /L 蛋白胨,3 g /L 酵母粉, 20 g /L甘油) 中,30 ℃ ( 200 r/min) 搖床培養(yǎng) 24 h 后,調(diào)整菌 體濃度至 OD600約為 1. 0,并按 1% 的比例接種至含 4% 碳源 的 NYG 中( 含相應(yīng)抗生素) ,30 ℃ ( 200 r/min) 搖床培養(yǎng) 5 d 后,加入 4 倍體積的無水乙醇沉淀胞外多糖,邊注入邊攪拌, 然后將絮狀沉淀物取出后置于 42 ℃ 充分干燥,所得即為黃 原膠。以黃原膠重量作為衡量發(fā)酵效果的標準。 


1. 2. 2 碳源對黃原膠發(fā)酵的影響


以淀粉、葡萄糖、麥芽糖 和蔗糖作為培養(yǎng)基碳源,考察碳源對黃原膠發(fā)酵的影響。在 NYG 中加入 4% 淀粉、4% 葡萄糖、4% 麥芽糖和 4% 蔗糖作 為培養(yǎng)基,按照“1. 2. 1”方法進行黃原膠發(fā)酵,每組發(fā)酵設(shè)計平行做 3 個。


2 結(jié)果與分析


為進一步提高基因工 程菌 XccYH1 的黃原膠產(chǎn)量,首先探索不同碳源對黃原膠產(chǎn) 量的影響。以淀粉、葡萄糖和麥芽糖為碳源時, 黃原膠產(chǎn)量無顯著性差異,而以蔗糖為碳源時,所產(chǎn)的黃原 膠產(chǎn)量最高,后續(xù)試驗中以蔗糖作為碳源測定黃原膠產(chǎn)量。在低濃度碳源( 2% ~ 6% ) 時,黃原膠產(chǎn)量隨著濃度的增 加而顯著增加,當添加 6% 蔗糖時黃原膠 產(chǎn) 量 最 高,達 20. 3 g /L。但繼續(xù)提高碳源濃度到 8% ,顯著抑制菌體生長,也沒有檢測到黃原膠。因此,碳源濃度為 6% 時,黃原膠產(chǎn)量 最高?;蚬こ叹? 穩(wěn)定性往往是能否進入工業(yè)化應(yīng)用的重要評價指標,在非抗 生素壓力條件下穩(wěn)定性好的菌種將具有更好的應(yīng)用前景,該 研究將 XccYH1 菌株在無抗性的培養(yǎng)基上連續(xù)劃線傳 10 代 后,菌落形態(tài)沒有差異,進一步考察了傳不同代數(shù)時黃原膠 的產(chǎn)量。


3 結(jié)論與討論 


野油菜黃單胞菌( Xcc) 是十字花科植物黑腐病菌的病原 菌,在全球范圍內(nèi)引起植物病害,造成重大的經(jīng)濟損失。Xcc 在植物侵染過程中產(chǎn)生眾多的致病因子,包括蛋白酶、纖維 素酶、胞外多糖等,因此 Xcc 也是研究細菌與植物互作的模式菌種。另一方面,Xcc 產(chǎn)生的胞外多糖( 黃原膠) 又具有 重要的工業(yè)價值,在食品、藥品、化妝品等諸多領(lǐng)域中有廣泛 的應(yīng)用。






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